乳酸桿菌鑒定試劑盒API50CHL說(shuō)明書

原理

API 50 CHL是用于乳酸桿菌(Lactpbacillus)和相關(guān)菌的鑒定，它是由49種可發(fā)酵碳水化合物的API 50 CH試驗(yàn)條組成的簡(jiǎn)易培養(yǎng)基。以測(cè)定菌制成懸液接種試驗(yàn)條的每一個(gè)小管。當(dāng)培養(yǎng)時(shí)，由于發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)酸，pH下降，使指示劑變色。結(jié)果構(gòu)成菌株的生化圖譜，并用于鑒定或分型。

試劑

一套(10次測(cè)定)包括：

- 10 個(gè)API 50 CHL培養(yǎng)基的安瓿

- 1份說(shuō)明書

附加產(chǎn)品(不包括在套裝產(chǎn)品內(nèi))：

- API 50 CH 試驗(yàn)條(ref. 50 300)

- McFarland 標(biāo)準(zhǔn)(ref. 70 900)點(diǎn)2或光密度計(jì)： DENSIMAT(ref. 99 234)

- 鑒定軟件（請(qǐng)聯(lián)系生物梅里埃索取有關(guān)資料）

- 吸管或PSI管(ref. 70 250)

- 礦物油(液體石臘) (ref. 70 100)

- 安瓿架 (ref. 70 200)

- 無(wú)菌棉拭子 (ref. 70 610)

- MRS 培養(yǎng)基

- 懸液基物2 m l (ref. 70 700) 和5 ml (ref. 20 150)

乳酸桿菌鑒定試劑盒API50CHL操作方法：

選取菌落

l 檢查菌株的純度。

l 接種菌株于MRS培養(yǎng)基上，30或37℃厭氧培養(yǎng)24小時(shí)。培養(yǎng)溫度取決菌株原來(lái)的生長(zhǎng)溫度。

l 檢查菌株歸屬于乳酸細(xì)菌群：革蘭氏(+)，接觸酶(-)，非芽孢厭氧(兼性或?qū)Ｐ?/span>)的桿菌，能生長(zhǎng)在MRS瓊脂上。

如果使用貯存菌株(干凍或傳代培養(yǎng))在MRS肉湯傳代2次后始接種於MRS瓊脂。

接種物的制備

l 用光密度計(jì) ：

- 按“警告和注意事項(xiàng)"(無(wú)滴頭安瓿) 所示，打開API 50 CHL 培養(yǎng)基。

- 挑取幾個(gè)一致的菌落，在API 50 CHL 培養(yǎng)中制得混濁度相當(dāng)于2  McFarland 的菌懸液。

l 不用光密度計(jì)：

- 按“警告和注意事項(xiàng)"(無(wú)滴頭安瓿)所示，打開懸液基物(2 ml) 的安瓿或用不含雜質(zhì)的無(wú)菌蒸 餾水試管。

- 用無(wú)菌棉簽挑取培養(yǎng)物上所有的細(xì)菌在管中制成濃的菌懸液(S)。

- 按“警告和注意事項(xiàng)"(無(wú)滴頭安瓿) 所示， 打開懸液基物 (5ml) 的安瓿，加入幾滴上述濃菌 (S)制得相當(dāng)于2 McFarland濁度的菌懸液，記錄滴數(shù)(n)。

- 按“警告和注意事項(xiàng)"所示，打開API 50 CHL培養(yǎng)基的安瓿，加2倍(2n)該菌液接種。

l 均勻。

試驗(yàn)條的接種

l 用巳接種的API 50 CHL 培養(yǎng)基加入驗(yàn)條的管(不加杯)，并用油覆蓋所有的測(cè)定。

l 于30℃或37℃好養(yǎng)培養(yǎng) 48小時(shí)。

判讀試驗(yàn)條

(見API 50 CH說(shuō)明書)

l 在培養(yǎng)24和48小時(shí)后讀。

l 陽(yáng)性結(jié)果：培養(yǎng)中所含溴甲酚紫指示劑變黃所示的產(chǎn)酸作用。

七葉靈測(cè)定(25號(hào)管)從紫變黑。

l 記錄于結(jié)果報(bào)告單。

所得該株菌的生化譜可用於：

l 用鑒定軟件包鑒定菌株。

l 根據(jù)記錄可與已鑒定的種比較。

與其它生化譜作分類研究。